Fungsi Zat Pewarna pada Pengecatan Gram

Zat warna adalah senyawa kimia berupa garam-garam yang salah satu ionnya berwarna. Garam terdiri dari ion bermuatan positif dan ion bermuatan negatif. Senyawa-senyawa kimia ini berfungsi untuk membedakan bakteri-bakteri karena reaksinya dengan sel bakteri akan memberikan warna berbeda. Perbedaan inilah yang digunakan sebagai dasar pewarnaan bakteri (Sutedjo , 1991).

Pengecatan Gram merupakan salah satu teknik pewarnaan yang digunakan untuk mengidentifikasi bakteri (mikroorganisme). Zat warna yang digunakan pada pengecatan Gram meliputi crystal violet , yodium , alkohol dan safranin. Fungsi dari masing-masing zat warna tersebut adalah :

1. Crystal Violet

Berwarna ungu. Merupakan pewarna primer (utama) yang akan memberi warna mikroorganisme target. Crystal Violet bersifat basa sehingga mampu berikatan dengan sel mikroorganisme yang bersifat asam , dengan begitu sel mikroorganisme yang transparan akan terlihat berwarna (Ungu).

2. Yodium

Merupakan pewarna Mordan , yaitu pewarna yang berfungsi memfiksasi pewarna primer yang diserap mikroorganisme target. Pemberian yodium pada pengecatan Gram dimaksudkan untuk memperkuat pengikatan warna oleh bakteri.

3. Alkohol

Solven organik yang berfungsi untuk membilas atau melunturkan kelebihan zat warna pada sel bakteri (mikroorganisme). Pemberian alkohol pada pengecatan ini dapat mengakibatkan terjadinya dua kemungkinan :

1. Mikroorganisme (bakteri) akan tetap berwarna ungu

2. Bakteri menjadi tidak berwarna

4. Safranin

Safranin merupakan pewarna tandingan atau pewarna sekunder. Zat ini berfungsi untuk mewarnai kembali sel-sel yang telah kehilangan pewarna utama setelah perlakuan dengan alkohol. Dengan kata lain , memberikan warna pada mikroorganisme non target

(Wahyuningsih , 2008).

Zat-zat warna tersebut dapat berikatan dengan komponen dinding sel bakteri dalam waktu singkat. Karena itulah rentang waktu pemberian zat warna yang satu ke yang lainnya tidak lama sehingga proses identifikasi bakteri berlangsung cepat (efisiensi waktu). Prosedur (tahap) diatas dapat dilakukan sesuai dengan waktu yaitu

(1) waktu 30 detik – 1 menit untuk pewarnaan dengan larutan crystal violet kemudian dibilas dengan air mengalir selama 2 detik. Pewarnaan selama 1 menit bertujuan agar cat ini dapat melekat sempurna pada dinding bakteri

(2) waktu 1 menit untuk penambahan larutan Yodium kemudian juga dibilas dengan air yang mengalir , dilakukan selama 1 menit agar pengikatan warna oleh bakteri menjadi lebih kuat.

(3) waktu 1 menit dilakukan pembilasan dengan alkohol kemudian dibilas dengan air yang mengalir , dilakukan selama 1 menit agar zat warna dapat luntur secara sempurna dan tidak ada yang tersisa.

(4) waktu 30-60 detik dilakukan penambahan larutan safranin, kemudian dibilas dengan air yang mengalir

(Prescott, 2002).

Table 1.1 . Urutan pewarnaan pada pengecatan Gram beserta hasilnya

no	Pewarna	Reaksi dan Penampakan pada Sel Bakteri
		Gram Positif	Gram Negatif
1	Crystal Violet (UK)	Sel berwarna ungu	Sel berwarna ungu
2	Yodium (Y)	KomplekUK-Y terbentuk di dalam sel, sel tetap berwarna ungu.	KomplekUK-Y terbentuk di dalam sel, sel tetap berwarna ungu
3	Alkohol	Dindind sel terdehidrasi , pori-pri menciut , daya rembes dinding sel dan membrane menurun. Komplek UK-Y tidak dapat keluar sel , sel tetap ungu.	Lipid terekstraksi dari dinding sel , pori-pori mengembang sehingga komplek UK-Y keluar sel. Sel tidak berwarna.
4	Safranin	Sel tidak terpengaruh. Sel Tetap berwarna ungu.	Sel menyerap zat warna dan sel berwarna merah

(Pelczar , 2007).

DAFTAR PUSTAKA

Pelczar ,M.J . 2007 . Dasar-Dasar Mikrobiologi . Universitas Indonesia Press : Jakarta.

Prescott, H. K., 2002. Microbiology. Mc Graw Hill : New York.

Sutedjo , M . 1991. Mikrobiologi Tanah. Rineka Cipta : Jakarta

Wahyuningsih . 2008 . Pengecatan Gram . Universitas Jenderal Soedirman , Fakultas Pertanian : Purwokerto.